[생명工學 Plasmid DNA preparation
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작성일 23-01-20 03:20
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(3) experiment(실험) 원리 :
Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다. SDS는 세포막을 분해 시킬 뿐만 아니라 단백질을 변성시킬 수 있어 핵산 가수분해효소들의 작용을 억제할 수 있다 단백질들은 phenol과 chloroform을 처리함으로써 제거할 수 있다 DNA는 alcohol에 의한 침전으로 얻을 수 있다 RNA는 RNase에 의해…(생략(省略))(4) experiment(실험) 재료 :
① Strain : Plasmid DNA【pBlue스크립트 SKⅡ(+)】
② LB (containing Ampicillin) broth
③ Solution I (100 mL)
③ Solution Ⅱ (100 mL)
④ Solution Ⅲ (100 mL)
⑤ TE buffer (100 mL)
? 1 mM EDTA (pH 8.0) (MW〓372.2, 0.04 g)
⑥ Ethanol, 7
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설명
[생명工學 Plasmid DNA preparation
다.
세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 시키며 세포막은 detergent인 SDS를 처리함으로써 분해 시킨다.
DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다.
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